原代细胞培养

原代培养物的来源是切除的动物组织,其作为外植体培养物,悬浮液或单层培养并在体外保持。将切除的组织进行酶处理,并将解离的细胞在适当条件下在培养基中培养直到它们达到足够数量。分离的原代细胞有两种类型:粘附细胞/锚定依赖性细胞和悬浮细胞/锚固体独立细胞。研究中最流行的原代细胞是上皮细胞,成纤维细胞,角质形成细胞,黑素细胞,内皮细胞,肌肉细胞,造血和间充质干细胞。

细胞培养代表了生物医学研究中的标准体外模型。不需要使用实验室动物,它们允许在生理和实验条件下对细胞机制进行复杂的研究。它们的应用范围从基础研究中的代谢途径研究到生物技术或制药工业中重组蛋白的生产。细胞培养技术的应用已经很成熟,在南博屹生物,我们成功地建立和规范了一些体外方法学

 

多媒体直接培养荧光染料法

该测试包括使用三种不同的支原体培养基制剂和指示细胞培养方法的多介质直接培养法。使用DNA荧光染料测定的指示细胞培养程序增强了对非培养支原体物种的检测。

用指示细胞系进行DNA荧光染色染色试验

这种通过接种指示细胞系的DNA荧光染料测定法通过减少来自遗传不稳定细胞系(例如杂交瘤等)的背景并放大支原体污染物的滴度来提高测定灵敏度的水平。为了检测细胞培养和相关样品中的支原体污染而开发的,该测试提供了可靠和及时的结果。

基于PCR的检测分析

在南博屹生物所做的所有测试中,速度最快,最容易。在该测定中,通过离心分离细胞培养上清液的细胞颗粒,分离并纯化DNA。将等分试样用于PCR引物混合物的PCR反应中,用于扩增迄今公开可用的序列数据库中列出的几乎所有支原体物种的保守16S rDNA区域中的序列。污染后,溴化乙锭染色的琼脂糖凝胶中可见504-519 bp的DNA片段(取决于支原体种类)。

主细胞系生成

原代细胞是直接从组织没有通道的细胞。原代细胞培养物可以由细胞类型的混合物组成。通常,一些细胞可能在没有增殖的情况下存活,并因此在体外提供的条件下能够繁殖的那些细胞的增加群体中丢失。

  • 来自外植体的细胞有时可以通过传代转化成细胞系。对于许多细胞世代来说,这些可能会继续增殖。
  • 南博屹生物还提供使用原代成纤维细胞作为饲养层的细胞,用于某些胚胎干细胞类型的生长。

细胞毒性/生长测定

通过MTT,XTT或任何定制方法(如Alamar blue)进行检测是基于代谢活性细胞将特殊染料转化为可测量的荧光团(如黄色四唑盐XTT)为橙色formasan的能力。因此避免了复杂的漂洗,例如在较老的MTT方法中这是必要的。这保证了XTT测试的高精度,并且可以快速处理所获得的数据。生物测定还可以用于建立各种化学类别内药剂的相对细胞毒性。通过比较这些基线数据和已知的体内毒性,我们可以建立基线数据来预测相关新药的毒性。由于指示剂是水溶性的,所以该分析操作简单,

稳定的细胞系表达

无论是通过shRNA还是通过shRNA敲除。具有特定基因过表达或敲低的稳定细胞系在基因功能分析,靶标发现,靶标验证,化验开发和化合物筛选中非常有用。

南博屹生物服务将为您提供

  • 您选择的组成型或诱导型启动子,标签,选择标记和荧光标记。您可以提供目标模板,也可以设计,合成或从cDNA收集中获得。
  • 将您的基因或shRNA克隆到我们的慢病毒载体中。
  • 生成慢病毒。
  • 转染感兴趣的细胞系。
  • 选择稳定转导的高表达细胞。
  • 通过基因组PCR验证靶标的基因组整合。
  • 通过Western Blot验证高表达克隆(如果适用)。
  • 生产两个低温保存的稳定细胞瓶和一份最终报告。

 其他基于细胞培养的服务

  • 细胞活力(细胞毒性)
  • 细胞增殖
  • 细胞凋亡
  • 细胞粘附
  • 细胞迁移
  • 细胞入侵
  • 细胞形状改变
  • 血管生成
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