细胞周期和细胞凋亡检测

细胞周期(G1/G0期,S期和G2/M期)和凋亡是评估细胞代谢,生理和病理学的非常重要的功能参数。 已经开发了几种技术来利用荧光染料的差异染色来定量这些参数。 流式细胞仪通常用于测定细胞周期和细胞凋亡。

细胞周期

细胞周期测定应用于早期毒性测试和筛选抗癌剂。抗癌治疗中最重要的方面之一是抑制细胞增殖和细胞分裂。

BCell循环测定应用于早期毒性测试和筛选抗癌剂。抗癌治疗中最重要的方面之一是抑制细胞增殖和细胞分裂。

通过多路复用细胞周期特异性细胞事件,可以使用高内涵筛选(HCS)方法分析这两个事件。实例是BrdU或EdU染色,其通过将核苷类似物尿苷掺入新合成的DNA链中来检测细胞周期的S期。

还存在与某些细胞周期阶段相关的良好验证的蛋白质标记物。一个例子是磷酸化的组蛋白H3(pHH3),它是常见的M期标记物。DNA直方图是另一种基本的分析工具,可以很好地转移到基于图像的每个细胞DNA含量的自动分析。

高含量筛选可以量化所有细胞周期分析读数参数,这些参数用于流式细胞仪,这是传统的细胞周期分析工具。细胞周期分析在很大程度上依赖于大量细胞的统计数据,因此为了获得可靠的数据,必须从每个样本中获取多个图像区域,并组合来自数千个细胞的数据。必须在短时间内分析大量单元以实现可接受的屏幕吞吐量。


上图显示了细胞周期阶段的示意图,EdU和pHH3检测的结合。在细胞周期的各个阶段,细胞已经用核标记物(蓝色),EdU抗体(绿色)和pHH3抗体(红色)染色。

通过多路复用细胞周期特异性细胞事件,可以使用高内涵筛选(HCS)方法分析这两个事件。实例是BrdU或EdU染色,其通过将核苷类似物尿苷掺入新合成的DNA链中来检测细胞周期的S期。

还存在与某些细胞周期阶段相关的良好验证的蛋白质标记物。一个例子是磷酸化的组蛋白H3(pHH3),它是常见的M期标记物。DNA直方图是另一种基本的分析工具,可以很好地转移到基于图像的每个细胞DNA含量的自动分析。

高含量筛选可以量化所有细胞周期分析读数参数,这些参数用于流式细胞仪,这是传统的细胞周期分析工具。细胞周期分析在很大程度上依赖于大量细胞的统计数据,因此为了获得可靠的数据,必须从每个样本中获取多个图像区域,并组合来自数千个细胞的数据。必须在短时间内分析大量单元以实现可接受的屏幕吞吐量。

细胞凋亡检测

南愽屹生物为所有客户提供细胞凋亡检测。程序性细胞死亡或凋亡的过程通常以不同的形态特征和能量依赖性生化机制为特征。细胞凋亡被认为是各种过程的重要组成部分,包括正常细胞更新,免疫系统的适当发育和功能,激素依赖性萎缩,胚胎发育和化学诱导的细胞死亡。不适当的细胞凋亡是许多人类疾病的一个因素,包括神经退行性疾病,缺血性损伤,自身免疫性疾病和许多类型的癌症。调节细胞生命或死亡的能力因其巨大的治疗潜力而得到认可。因此, 

图1。细胞凋亡途径

南愽屹生物提供多种细胞凋亡检测方法,用于在多种检测平台上测量多种成分,以加速客户的研究。

  • 通过流式细胞术分析的膜联蛋白V结合测定通过质膜上磷脂酰丝氨酸的出现检测质膜组成和功能的变化,其与膜联蛋白V-荧光染料缀合物反应。结合染色,该方法可以区分早期和晚期凋亡事件。 
  • 半胱天冬酶活性测定半胱天冬酶的活化是早期细胞凋亡的特征。南愽屹生物提供多种半胱氨酸蛋白酶测定,包括微量滴定板中的比色/荧光底物测定,流式细胞仪/显微镜检测荧光底物的切割,或通过微量滴定板分析,Western blot分析,流式细胞术用特异性识别半胱天冬酶活性形式的抗体进行显微镜/微孔板分光光度法分析。
  • 线粒体膜电位测定线粒体在该过程中起重要作用,其可以通过线粒体内外的凋亡因子(例如Bax和细胞色素c)的易位来识别。
  • DNA片段化和形态学基于其降低的DNA含量和包括核浓缩的形态变化识别凋亡细胞,并且可以通过流式细胞术(亚G1-DNA含量),台盼蓝或Hoechst染色检测凋亡细胞。我们的分析为研究原位凋亡DNA片段化提供了快速可靠的检测方法。
  • 其他分析可用基于核浓缩,非半胱天冬酶蛋白酶(组织蛋白酶和钙蛋白酶)激活,半胱天冬酶底物(PARP)切割和抗凋亡Bcl-2家族蛋白的切割,可获得其他测定。

创造性的生物阵列优势

  • 我们可以处理的各种细胞/组织类型:活细胞,细胞提取物,组织提取物或固定细胞
  • 可用的分析技术:流式细胞术,蛋白质印迹,显微镜和比色/荧光底物测定
  • 卓越的性能 – 高灵敏度检测,以检测细胞凋亡的不同阶段:前期,前期和中期,后期
  • 多样化的选择 – 大量的检测方法来检测不同的参数
  • 快速周转时间

结果示例

图2膜联蛋白V结合试验 – 检测HCT116细胞的凋亡

报价和订购

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