基因敲除服务

基因组编辑技术的最新进展 – 使用TALEN或CRISPR对基因进行有针对性的永久性改变 – 已经彻底改变了分子遗传学。 南博屹生物除了使用shRNA或干扰RNA(siRNA)在动物中缺失基因的RNA干扰(RNAi)介导的敲除之外,还利用TALEN或CRISPR技术。

CRISPR / Cas9基因敲除原理概述

CRISPR是一种免疫机制,来自细菌,用于降解侵入性病毒DNA或其他外源DNA。细菌和古细菌之间的CRISPR系统分为3种类型。I类和III类需要多种CRISPR相关系统蛋白(Cas蛋白)共同发挥作用,而II类系统仅需要一种Cas蛋白,这为其广泛应用提供了便利。

目前,化脓性链球菌CRISPR-Cas9系统的应用是最广泛使用的。Cas9蛋白(含有两个核酸酶结构域)可以

分别切割两条单链DNA。Cas9首先将crRNA和tracrRNA结合形成复合物,然后通过PAM序列结合并侵入

DNA,形成RNA-DNA复合结构,切割靶DNA双链并使DNA双链断裂。

 

由于PAM序列(5′-NGG-3’)的结构简单,几乎所有基因都能找到大量的靶标,因此被广泛使用。CRISPR-Cas9

系统已成功应用于植物,细菌,酵母,鱼类和哺乳动物细胞,是目前最有效的基因组编辑系统。

使用基因工程方法修饰crRNA和tracrRNA,并连接它们以获得sgRNA(单指导RNA)。融合RNA具有相似的活性

野生型RNA,但由于结构简化,更便于研究人员使用。Ligate sgRNA表达元件和Cas9表达元件

获得同时表达两者的质粒,然后将质粒转染到细胞中以对靶基因起作用。

图:Cas9与靶DNA结合并通过指导RNA切割。

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