转染定量分析

转染定量分析——ELISA、蛋白质印迹(Western blot)、实时定量PCR(qRT-PCR)

ELISA,蛋白质印迹(Western blot)和实时定量PCR(qRT-PCR)

蛋白质印迹(Western blot)

Western Blot是一种很好用的检测方法,可检测蛋白质混合物中的单一蛋白质。它需要获得对靶蛋白高度特异的抗体。   Western Blot程序包括三个步骤。首先,使用凝胶电泳通过大小分离蛋白质。然后将分离的条带转移到硝酸纤维素膜或固体支持物上,然后与对靶蛋白质特异的抗体一起温育。通过另外的洗涤步骤除去未结合其靶蛋白的抗体,并开发该膜以确定与抗体结合的半定量量和大小的蛋白质。随后通过荧光或比色酶标签如HRP完成膜的成像。

ELISA

ELISA(酶联免疫吸附测定)用于评估抗体结合强度(Kd测量),信号转导,分泌蛋白的定量和细胞活力。大多数合同研究组织将建立使用其自身试剂的ELISA方案,并能够快速调整其方案以获得新的蛋白质靶标。

ELISA依赖于与目标靶蛋白结合的单克隆或多克隆抗体。强烈建议分配时间进行鉴定最特异性抗体的实验,并优化与ELISA检测相关的浓度和试剂。输出信号依赖于荧光,光学,发光或放射性变化。南博屹生物提供的ELISA服务,可以帮助优化和获得低信噪比的数据。

实时定量PCR(qRT-PCR)

PCR是用于在受控环境中产生数百万拷贝的样品核酸的基本技术。这种节省时间的技术绕过了使用细菌增加DNA量的其他方法。它是一种多功能技术,具有多种可用于不同目的的变体。PCR以单链DNA开始,其用作复制的起始模板,并且反复复制新创建的拷贝直至其中一种关键试剂耗尽。研究人员可以选择性地扩增所需的DNA序列,以确定基因表达水平,突变,INDEL或基因组拷贝数。这种复制策略可以帮助科学家研究各种大小的DNA,从小的20 bp片段到长度的千碱基。

通过采用最新的CCD相机,LED激发灯,荧光检测探针,自动化技术和DNA引物,新型机器驱动PCR在检测少于100个模板的起始拷贝时非常敏感。qRT-PCR(定量逆转录-PCR)能够检测由siRNA或miRNA转染引起的基因表达的微小变化。

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