棋盘滴定的一个例子

ELISA抗体/抗原浓度优化与ELISA检测系统优化

ELISA抗体/抗原浓度优化

酶与荧光结合物

选择最佳的ELISA / IHC检测方法

为了使ELISA产生有用的数据,必须以这样的方式检测在每个孔中结合的蛋白质,使得信号强度与蛋白质浓度线性相关。为此,使用标记的二抗。选择使用哪种检测系统受可用设备和所考虑的特定应用的需求的影响。使用本指南可帮助确定是否使用酶联二抗或荧光标记的二抗作为检测系统。

酶共轭物荧光共轭物
优点§  信号放大提供更高的灵敏度

§  更长的保质期

§  能够产生生色,化学发光或荧光信号

§  可以与更简单的设备一起使用

§  无基材要求

§  信号不受内源酶的影响

§  不太可能干扰抗体的结合亲和力

缺点§  可能会干扰结合亲和力

§  需要对光敏感且易于降解的基材

§  内源性酶可能产生竞争信号

§  不太通用

§  需要更专业的设备

§  不太敏感

§  保质期更短

§  样品自发荧光可能产生竞争信号

 

ELISA检测系统优化

棋盘滴定

为了从ELISA检测中获得最佳结果,必须优化样品和检测抗体的稀释因子。如果您的样本或抗体过于浓缩,您可能会使测定饱和; 如果它们不够集中,你的信号将很弱并且难以检测。对于强大,可量化的信号,使用棋盘滴定法测试样品和检测抗体的最佳浓度。

棋盘滴定可用于一次评估两个变量:在这种情况下,抗体浓度和样品浓度。通过以不同的样品与抗体比例运行每个孔,您不仅可以找到每种孔的最佳浓度,还可以找到最佳浓度比。使用从棋盘分析中收集的信息,您可以使用适合您应用的最佳浓度进行ELISA实验,并获得更好的结果。

棋盘滴定的一个例子

棋盘滴定的一个例子。每列1-12含有抗体稀释因子,而行AH含有样品稀释因子。

 

关键词: ELISA,优化,抗体,抗原,样品,浓度,棋盘,滴定,ELISA,优化,酶,荧光,酶,结合物,二抗

 

Posted in 技术文章 and tagged , , , , .

发表评论

电子邮件地址不会被公开。 必填项已用*标注