ELISA板洗涤优化

ELISA板洗涤优化

ELISA板洗涤优化

ELISA测定的一个明确特征是能够快速有效地洗去未结合的分子。这允许ELISA分析从原始样品中捕获特异性抗原或抗体,使研究人员能够识别,分离和定量几乎任何分子。优化洗涤步骤的参数对于从ELISA测定获得最佳结果至关重要。使用本指南可帮助您确定如何优化洗涤参数:

清洗量

优化的最重要参数之一是洗涤体积。用于洗涤ELISA孔的洗涤溶液的量影响洗涤的严格性:可能保留太少且未结合的分子,大大增加背景信号; 太多了,你冒着剥离特异性结合分子的风险。

根据经验,洗涤体积应至少与涂层体积一样高; 制造商将在数据表上列出涂层量,为您的优化提供一个起点。常用的行业标准是200μl,制造商通常会建议300μl洗涤体积。

洗涤周期数

您可能希望考虑的另一个主要参数是使用的洗涤循环次数。与洗涤体积一样,洗涤周期太少会导致高背景,而太多洗涤会降低信号强度。洗涤周期的典型数量是三个; 但是,您必须考虑制造商的建议和您使用的印版类型:制造商涂覆的印版通常比内部涂覆的印版需要更少的清洗。

吸气参数

洗涤缓冲液的吸入对于优化是重要的。有几个变量需要考虑,包括抽吸高度,抽吸方法和井形。

吸气高度,即从井底到吸气头的距离,对井的剩余体积有显着贡献。洗涤缓冲液的残留量包括未结合的分子,并且更大的体积导致更高的背景。刚性吸气头的最佳高度范围仅为0.1mm; 即使稍微过高或过低都会大幅增加剩余容积。精确校准洗涤步骤对于刚性抽吸头是至关重要的。浮动头可以根据体积在井中上下移动,因此调整高度不太重要。

井本身的形状也会影响剩余体积。具有尖角的井倾向于保留最大的剩余体积,而v井保留最少。如果您遇到难以排除故障的高背景,请调查此参数。

鉴于洗涤步骤的重要性,您可能希望在执行敏感实验之前执行测试以校准您的洗涤。

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